2020年夏季昌黎县貉细小病毒免疫分析

许玲涵，赵远，刘志强，王殿永，李金波 ，李富金

昌黎县动物疫病预防控制中心，齐鲁动物保健品有限公司技术服务部，昌黎县农业农村局

　　摘 要：通过入户调查及抽检免疫貉血样检测细小病毒血凝-血凝抑制抗体的方法，了解养貉之乡昌黎县养殖场细小病毒性肠炎疫苗免疫情况及不同疫苗、不同免疫程序的免疫效果，以便指导貉细小病毒病防控及养殖生产。结果表明：7月份调查的昌黎县貉养殖户细小病毒性肠炎疫苗免疫率达100%，抗体均值为27.03，合格率89.5%;不同公司的疫苗效果,A公司最好，B公司次之，D公司稍差，C公司活疫苗效果最差;不同类型疫苗结果统计,灭活疫苗效果好于活疫苗;不同免疫程序统计结果，多次免疫好于单次免疫。

　　貉病毒性肠炎是由细小病毒引起貉的一种急性、烈性、高度接触性病毒性传染病，以病貉呕吐、剧烈腹泻、高发病率和高死亡率为主要特征，是危害貉业养殖与发展的重要传染病之一。昌黎是“中国养貉之乡”，养殖户多，饲养密度大，但饲养粗放，容易暴发疫病，近几年貉细小病毒性肠炎发病呈地方性流行趋势，不同年龄和品种的貉均有发生，断奶前后的幼貉发病最多，死亡率高达90%以上，给养殖户带来巨大经济损失。该病无有效化学药物用于治疗，通过临床实践，技术人员逐渐摸索出用现有疫苗采用早免疫及2次免疫的防控措施，取得一定临床效果，疫病得以有效控制。也有部分养殖户因疫苗选择不当或者免疫程序不合理造成发病，为了解2020年夏季昌黎县该病防疫情况，随机选择了部分养殖户调研，对貉群进行随机采血和实验室血清学检测，了解不同疫苗、不同免疫次数后抗体情况，以便指导昌黎县貉养殖生产。现将结果报道如下。

　　1 、材料与方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 疫苗 河北省秦皇岛市昌黎县貉养殖场免疫的病毒性肠炎疫苗，分属于国产A、B、C、D 4个公司，其中2种灭活疫苗，分别为A公司水貂病毒性肠炎病毒杆状病毒载体灭活疫苗及B公司水貂病毒性肠炎灭活疫苗;2种活疫苗，均为C公司及D公司的犬瘟热、和病毒性肠炎弱毒二联活疫苗(D公司提供貉专用稀释液)。

　　1.1.2 血清 血样176份，采自河北昌黎县24个貉养殖场的免疫青年貉，后肢外侧隐静脉采血2ml/只，采血时间为6月20日～7月10日。

　　1.1.3 采血及集血器具 一次性静脉输液针、2ml一次性注射器、V型管等。

　　1.1.4 实验室设备 离心机、冰箱、移液枪、96孔V型板等。

　　1.1.5 病毒及红细胞 貉细小病毒性肠炎病毒(8单位病毒)和1%猪红细胞及猪红细胞泥,均由齐鲁动物保健品有限公司研究所自制。

　　1.2 方法

　　1.2.1 貉的免疫 仔貉免疫程序基本相同，首免时间为45～60日龄，二免时间为首免后间隔14～28d，无论活疫苗还是灭活疫苗免疫剂量均为1头份/只。三免不属正常免疫程序，是貉群发病后紧急免疫的灭活疫苗。

　　1.2.2 血样处理 将采集的血样静置，待析出血清后，经8000r/min离心5 min，取上层血清转移至1.5 ml离心管中，做好标记，56℃灭活30min，即为待检样品。

　　1.2.3 HI抗体检测 利用细小病毒具有血凝的特性，采用微量血凝试验，将待检血清灭能后，经脱敏处理，在96孔V型板上做倍比稀释，然后与8单位细小病毒抗原中和30 min，然后加入1%猪红细胞，4℃作用30min，观察凝集情况，记录HI抗体滴度。

　　1.2.4 结果判定 细小病毒HI抗体≥25判为阳性。

　　2、结果

　　2.1 养殖户对貉免疫情况调研

　　通过对昌黎县24个养殖户的调查发现，所有养殖户都给仔貉免疫了至少1次疫苗，免疫率100%，截止到7月中旬，1次免疫率为58.3%(14/24)，2次以上免疫率为41.7%。对于疫苗选择，选择A公司灭活疫苗的户最多，有20户，占比约83.3%;选D公司二联活疫苗的最少，有2户，占比约8.3%;免疫B公司的3户，占比12.5%;免疫C公司二联活疫苗户因部分户的仔兽免疫失败，仔貉发病，养殖户均进行了灭活疫苗紧急补免，因此单独免疫次数为0(表1)。通过调查还发现，养殖户对疫苗品牌不信任，多数人对疫苗选择不专业，受快手、微信等通讯手段影响比较大，并且心存侥幸的现象比较严重，追求低价，盲目随从，有的自己选择多家疫苗进行临床对比。

表1 养殖户疫苗选择及免疫次数统计结果

　　2.2 免疫兽细小病毒性肠炎血清抗体情况

　　由表2可见,昌黎县抽检的免疫兽抗体均值为27.03，合格率89.5%，符合细小病毒群体免疫要求(采血时貉细小病毒性肠炎疫情已平稳)。采集的103份免疫1次的血样，抗体均值为26.9，合格率87.4%，其中免疫灭活疫苗血样91份，抗体均值为27.11，合格率92.2%，免疫活疫苗血样12份，抗体均值为25.3，合格率50.0%;做2次免疫血样68份，抗体均值为27.06，合格率85.3%，其中做2次灭活疫苗血样40份，抗体均值为28.03，合格率97.5%，做2次活疫苗血样11份，抗体均值为23.45，合格率27.2%，首免活疫苗，二免灭活疫苗血样17份，抗体均值为27.12，合格率94.1%;免疫3次疫苗血样5份，抗体均值为29.2，合格率100%。

表2 176份细小病毒性肠炎血样抗体结果统计

　　2.3 不同疫苗不同免疫程序的免疫效果

　　由表3可见，A公司疫苗免疫1次抗体均值为26.56，合格率96.7%，做2次免疫的血样抗体均值为27.82，合格率98.0%;B公司疫苗免疫1次抗体均值为26.0，合格率80.0%;C公司疫苗免疫1次抗体均值为26.75，合格率75.0%，做2次免疫的血样抗体均值为24.6，合格率46.7%;D公司疫苗免疫1次抗体均值为26.3，合格率75%。

　　首免C公司弱毒活疫苗，二免A公司灭活疫苗，二免后15 d以上采血，免疫貉血清抗体均值为26.85，合格率92.3%;首免、二免C公司弱毒活疫苗，三免A公司灭活疫苗(发病后强免)，三免后15 d以上采血，免疫貉血清抗体均值为29.2，合格率100%。

表3 不同公司不同免疫程序效果统计

　　3、结论与讨论

　　对采集的176份血样进行细小病毒性肠炎抗体检测，结果显示，抽检样抗体均值为27.03，合格率89.5%，达到细小病毒群体免疫要求。对比不同免疫次数血样抗体均值，二免均值高于一免，三免后抗体均值最高，为29.2，显示免疫次数越多免疫效果越好。三免合格率为100%，二免后合格率85.3%，低于一免的合格率87.4%，这与2次免疫活疫苗血清抗体合格率仅为27.2%有关，推测活疫苗2次免疫后抗体均值及合格率降低的原因，可能与免疫程序安排不合理一免抗体被中和有关。

　　对比不同类型细小病毒疫苗免疫效果，灭活疫苗效果好于活疫苗。对不同公司疫苗免疫效果对比，昌黎县养殖户选择A公司灭活疫苗免疫效果最好，B公司灭活疫苗次之，D公司二联活疫苗好于C公司二联活疫苗。

　　最近几年貉细小病毒在昌黎县有局部流行现象，不免疫疫苗，一旦发病，当年生仔貉死亡率达80%以上，损失惨重，养殖场已经充分认识到该病预防的重要性，从过去不免疫肠炎疫苗到目前免疫率达100%。但是在选择疫苗上，由于部分养殖户对各公司及不同类型疫苗了解浮于表面或者受快手、微信等宣传的影响，选择比较随意，也有的对什么苗都不放心，同时选择2～3家疫苗，防止全群免疫失败，结果疫苗免疫效果不理想，有部分发病现象。从最近几年的临床效果看，防控貉细小病毒性肠炎，选择灭活疫苗早免疫及进行2次免疫是最有效方案，从本次血样抗体结果分析也能看出，灭活疫苗2次免疫抗体均值为27.82，合格率98.0%，结果比较理想。

　　细小病毒可感染貂、狐、貉、果子狸及虎等多种动物，引起幼龄动物腹泻死亡，是特种养殖及野生动物圈养必须重点防疫传染病。过去常见水貂细小病毒,最近几年以犬细小病毒为主，也是貉细小病毒性肠炎多发原因。疫情的变化促进了防疫措施的改变，养殖场防病意识增强，免疫率普遍提高，疫病得以有效控制。本研究结果显示，措施得当，貉细小病毒性肠炎可防可控。